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論免疫金標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展
免疫膠金標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展已不僅僅局限在其作為示蹤標(biāo)志物的功能方面，已有關(guān)于放大檢測(cè)信號(hào)方法研究的報(bào)道。生物素?親和素系統(tǒng)應(yīng)用于免疫金標(biāo)記技術(shù)，帶正電荷的鏈霉親和素標(biāo)記在帶負(fù)電荷的膠體金顆粒上，又能與生物素緊密結(jié)合，使檢測(cè)信號(hào)在只有膠體金標(biāo)記的基礎(chǔ)上得到擴(kuò)大[14]。Hou等[15]利用縮氨酸與硝酸纖維素膜的相互作用固定生物素抗體于膜上，并分別采用有無(wú)銀增強(qiáng)金標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)生物素化縮氨酸，無(wú)銀增強(qiáng)檢出限為100 amol/mL，銀增強(qiáng)金標(biāo)記檢出限可達(dá)100 zmol/mL。Tanaka等[16]將一抗也標(biāo)記上膠體金，作為信號(hào)增強(qiáng)子從而提高檢測(cè)的靈敏度，可檢測(cè)到人血清中10 pg/mL HCG，達(dá)到了ELISA方法檢測(cè)的靈敏度。Ambrosi等[17]采用雙標(biāo)記方法將酶標(biāo)二抗標(biāo)記在膠體金上，一個(gè)15 nm的膠體金顆粒上可以標(biāo)記約10個(gè)酶標(biāo)二抗分子，其檢測(cè)靈敏度比常規(guī)ELISA方法更高。
抗原（Antigen）； 銀顆粒（Silver nanoparticle）； 金顆粒（Gold nanoparticle）； 抗體（Antibody）。近年來(lái)，免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)得到了不斷地發(fā)展和改進(jìn)，微波（MW）技術(shù)開(kāi)始應(yīng)用其中。Galvez等[13]在不改變其它實(shí)驗(yàn)條件的情況下采用微波技術(shù)進(jìn)行標(biāo)記，使標(biāo)記過(guò)程中固定時(shí)間至少縮短20 min。 兩種技術(shù)的結(jié)合使標(biāo)記效果更好，背景清晰，而且縮短染色時(shí)間。同時(shí)增加反應(yīng)強(qiáng)度后較常規(guī)方法所需抗體濃度低，可節(jié)約價(jià)格昂貴的一抗。
Nam等[18]在免疫金標(biāo)記技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展了BCA（Ｂio?barcode amplification）擴(kuò)增技術(shù)，金顆粒表面修飾了起信號(hào)放大作用的條形碼DNA和針對(duì)待測(cè)蛋白的抗體，磁微粒表面則修飾待測(cè)蛋白的另一種單克隆抗體。兩者與待測(cè)蛋白形成復(fù)合結(jié)構(gòu)，復(fù)合物經(jīng)過(guò)磁場(chǎng)分離，金顆粒受熱變性釋放條形碼DNA，通過(guò)對(duì)其進(jìn)行無(wú)PCR或PCR檢測(cè)，間接檢測(cè)目標(biāo)蛋白，檢出限分別達(dá)30和3 amol。經(jīng)過(guò)多次信號(hào)放大技術(shù)，克服了對(duì)酶促反應(yīng)的依賴，檢測(cè)靈敏度比ELISA高103～106倍，并可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)蛋白[19]。鐘曉琴等[20]在BCA方法的基礎(chǔ)上，將膠體金免疫標(biāo)記技術(shù)與酶免疫標(biāo)記技術(shù)有效地結(jié)合起來(lái)，制備酶標(biāo)金探針。其靈敏度高且步驟簡(jiǎn)單，只需普通光學(xué)儀器即可檢測(cè)蛋白質(zhì)。通過(guò)對(duì)免疫金標(biāo)記技術(shù)研究工作的不斷深入，必將使該技術(shù)的使用效果更佳，應(yīng)用于更多的研究領(lǐng)域。
免疫層析法（Immunochromatography）是20世紀(jì)90年代興起的一種快速診斷技術(shù)，膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）就是利用膠體金本身的顯色特點(diǎn)結(jié)合免疫層析技術(shù)診斷特異性的待測(cè)物而發(fā)展起來(lái)的。這項(xiàng)技術(shù)既可采用雙抗體夾心法測(cè)抗原，又可用間接法、競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體。在該技術(shù)基礎(chǔ)上研制的膠體金免疫層析試紙條、試劑盒操作起來(lái)方便快捷，應(yīng)用前景廣闊。
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