《恒古骨傷愈片中橙皮苷含量的檢測方法》論文
恒古骨傷愈片是由中成藥恒古骨傷愈合劑(收載于《國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編 骨傷科分冊》)改變劑型而制成的新制劑[1],藥味由陳皮、紅花、三七等9味中藥組成,具有活血益氣、補肝腎、接骨續(xù)筋、消腫止痛、促進(jìn)骨折愈合的功效,用于新鮮骨折及陳舊骨折、股骨頭壞死、骨關(guān)節(jié)病、腰椎間盤突出癥等。為控制本品的`質(zhì)量,本試驗采用高效液相色譜(HPLC)法測定了恒古骨傷愈片中橙皮苷的含量,作為其內(nèi)在質(zhì)量控制指標(biāo)之一。
1 儀器與試藥
日本島津LC-10 AT高效液相色譜儀；SPD-10A紫外檢測器；KQ-250型超聲波處理器。
橙皮苷對照品購于中國藥品生物制品檢定所(批號1107221-200211,HPLC面積歸一化法,測定含量為99.99%)；恒古骨傷愈片由吉林萬德制藥有限公司提供(批號20080401, 20080402,20080403,20080501,20080502,20080503,20080504, 20080505,20080506,2008057)。其他所用化學(xué)試劑均為國產(chǎn)AR級。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
色譜柱：Shim-pack-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流動相為乙腈-0.4%磷酸水(20∶80)；流速：1 mL/min；紫外檢測波長：283 nm；理論塔板數(shù)按大黃素計算不低于5 000；柱溫為室溫[2]。
2.2 對照品溶液的制備
精密稱取橙皮苷對照品適量,加甲醇制成每1 mL約含0.05 mg的溶液,即對照品溶液。
2.3 供試品溶液的制備
取本品20片,研細(xì),取約0.3 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,稱定重量,超聲提取(功率180 W、頻率60 kHz)30 min,取出,放冷,再稱定重量,加甲醇補足減失的重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,即得。
2.4 陰性對照溶液的制備
按處方量制備不含陳皮藥材的陰性樣品,按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL,注入液相色譜儀中,按上述色譜條件測定。結(jié)果表明,陰性對照溶液色譜圖中與對照品相應(yīng)位置處無干擾,此法可行。
2.5 線性關(guān)系考察
精密稱取橙皮苷對照品適量,加甲醇制成每1 mL含橙皮苷0.048 5 mg的對照品溶液。精密吸取對照品溶液4、8、12、16、20 μL注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,測定其峰面積。以峰面積值(A)對進(jìn)樣量(C)進(jìn)行回歸,得到回歸方程為：Y＝1 008 770.377X＋25 623.859,r＝0.999 9,結(jié)果表明,橙皮苷在0.194～0.970 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
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