雙縮脲反應是肽和蛋白質(zhì)所特有的，而為氨基酸所沒有的一種顏色反應。一般分子中含有兩個氨基甲酪基的化合物與堿性溶液作用，生成紫色或者藍紫色的絡合物。由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此也能與銅離子在堿性溶液中發(fā)生雙縮脲反應，且顏色深淺與蛋白質(zhì)的含量的關(guān)系在一定范圍內(nèi)符合比爾定律，而與蛋白質(zhì)的氨基酸組成及分子量無關(guān)，故可用雙縮脲法測定蛋白質(zhì)的含量。
雙縮脲反應主要涉及肽鍵，因此受蛋白質(zhì)特異性影響較小。且使用試劑價廉易得，操作簡便，可測定的范圍為1～10mg蛋白質(zhì)，適于精度要求不太高的蛋白質(zhì)含量的測定，能測出的蛋白質(zhì)含量須在約0.5mg以上。雙縮脲法的缺點是精確度低、所需樣品量大。干擾此測定的物質(zhì)包括在性質(zhì)上是氨基酸或肽的緩沖液，如TrIs緩沖液，因為它們產(chǎn)生陽性呈色反應，銅離子也容易被還原，有時出現(xiàn)紅色沉淀。