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有關(guān)獨(dú)子藤中主要藥性成分的測試
儀器與試藥
儀器
Shimadzu LC-10AT型高效液相色譜儀（日本島津公司），SPD-10AT型紫外-可見檢測器（日本島津公司），HW-2000色譜工作站；Millipore溶液過濾器；Millipore 0.45 μm濾膜；AY120電子分析天平（Shimadzu公司）；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。
試藥
雷公藤紅素對(duì)照品（自制，經(jīng)HPLC法測定純度≥98%）；獨(dú)子藤于2008年10月采自廣東省陽春市，由廣東藥學(xué)院李書淵教授鑒定為獨(dú)子藤Celastrus monospermus Roxb.;硅膠（柱層析硅膠，青島海洋化工有限公司）；甲醇為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。
方法與結(jié)果
供試品溶液的制備
取獨(dú)子藤藥材適量，粉碎過40目篩，精密稱取10.0 g，裝入100 mL帶塞三角瓶中，加入三氯甲烷超聲提取3次，每次50 mL，每次30 min。靜置，濾取上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至干。稱取4.0 g硅膠裝柱（1.5 cm×10 cm），以三氯甲烷1 mL超聲溶解樣品，上樣。先以三氯甲烷50 mL進(jìn)行洗脫，棄去洗脫液，再用三氯甲烷-甲醇（體積比95∶5）100 mL洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至干。殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ萦?0 mL容量瓶中，0?45 μm微孔濾膜濾過。平行操作5份，作為1~5號(hào)供試品溶液。
線性關(guān)系的考察
分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液1、2、3、4、5 mL置于5 mL容量瓶中，分別用甲醇溶解并定容，搖勻，制得系列對(duì)照品溶液。依次取上述溶液各20 μL進(jìn)樣，依法測定。以雷公藤紅素的峰面積積分值（A）為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（ρ）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A=5.5886×103ρ-2.0127×104（r=0.999 1）。結(jié)果表明，雷公藤紅素在40~200 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。
精密度試驗(yàn)
精密吸取同一雷公藤紅素對(duì)照品溶液20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測得雷公藤紅素的峰面積RSD為1?96%，結(jié)果表明儀器精密度良好。取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，依法測定，結(jié)果雷公藤紅素峰面積的RSD為2?98%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。取同一批次的獨(dú)子藤藥材，稱取5份，按“2.3”項(xiàng)下方法處理并進(jìn)樣測定，結(jié)果雷公藤紅素峰面積的RSD為2.59%，表明本方法重復(fù)性良好。
加樣回收率試驗(yàn)
取獨(dú)子藤藥材6份，各5 g，精密稱定，分別按低、中、高不同質(zhì)量精密加入雷公藤紅素對(duì)照品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。雷公藤紅素為木栓烷型三萜類化合物，是雷公藤片、雷公藤多苷片等治療類風(fēng)濕病制劑的有效成分之一，主要來源于中藥雷公藤的根皮，具有抗炎、免疫抑制及抗腫瘤等多種藥理活性[3]。中美科學(xué)家于2006年聯(lián)合發(fā)現(xiàn)雷公藤紅素的抗癌新機(jī)制[4]，引發(fā)了雷公藤紅素抗癌活性研究的熱潮。我們?cè)讵?dú)子藤的化學(xué)成分研究中發(fā)現(xiàn)該植物根中富含雷公藤紅素，是一種潛在的雷公藤紅素植物資源，具有重要開發(fā)價(jià)值。但至今尚未見有關(guān)獨(dú)子藤中雷公藤紅素含量測定的文獻(xiàn)報(bào)道。本文建立了獨(dú)子藤中雷公藤紅素的含量測定方法，對(duì)合理開發(fā)獨(dú)子藤植物資源、促進(jìn)雷公藤紅素的深入研究，均具有重要意義本文方法測得獨(dú)子藤中雷公藤紅素的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.055 5%，相對(duì)較高，提示可將獨(dú)子藤作為雷公藤紅素的藥用植物資源加以開發(fā)利用，具有重要意義。且雷公藤紅素的毒性很大，建立并完善雷公藤紅素的含量測定方法，亦有助于安全合理地利用獨(dú)子藤藥材。
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