人參中的水溶性蛋白含量測試論文范本
1 儀器與材料
DS-1型高速組織搗碎機(jī)（上海標(biāo)本模型廠）；高速離心機(jī)Minispin（德國Eppendorf公司）；CP225D型電子天平（十萬分之一，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；透析帶（XH420，截留分子量：6000-8000）；LL3000 型冷凍干燥機(jī)（德國Heto公司）；Multiskan MK3型酶標(biāo)儀（Thermo公司）；DYY-8C型電泳儀（北京六一儀器廠）；JD801凝膠電泳圖像分析系統(tǒng)（江蘇省捷達(dá)科技發(fā)展有限公司）；
Tris（Sigma公司）；硫酸銨（Sigma公司）；SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白（分子量依次為：97.0 kDa，66.2 kDa，43.0 kDa，31.0 kDa，20.1 kDa，14.4 kDa），購自于中科院上海生物化學(xué)研究所。其它試劑均為國產(chǎn)分析純。
5年生園參、野山參及西洋參均購自于吉林省靖宇縣，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心姜大成教授鑒定，人參為五加科（Araliaceae）植物Panax ginseng C. A. Meyer的干燥根莖，野生者為野山參。西洋參為五加科植物西洋參Panax quinquefolium L.的干燥根莖，符合《中國藥典》（2005版Ⅰ部）的規(guī)定。
2 方法與結(jié)果
2.1 園參、野山參、西洋參水溶性蛋白的制備
取5年生園參、野山參、西洋參鮮品適量，稱重，高速組織搗碎機(jī)粉碎，加適量含0.15 mol/L NaCl的pH 7.4 10 mmol/L Tris-HCl緩沖液，4℃浸提24h，10 000 r/min離心10min，上清液用80%硫酸銨沉淀，4℃靜置過夜，沉淀加適量體積的pH7.4 10mmol/L Tris-HCl緩沖液溶解，對(duì)蒸餾水過夜透析，-20℃預(yù)凍，凍干，得三者的水溶性蛋白，收率見表1。由表1可知，野山參及西洋參中水溶性蛋白的含量較園參中的蛋白低很多，西洋參中的水溶性蛋白為園參的50%左右，而野山參中的水溶性蛋白，僅為園參的10%。
2.2 SDS-PAGE檢測及凝膠圖譜分析
取上述制備的蛋白樣品各5 mg，用蒸餾水配制成濃度為5 mg/ml的蛋白溶液，經(jīng)SDS-PAGE檢測（分離膠濃度為15%，濃縮膠濃度為5%。濃縮膠電壓為70 mV，分離膠電壓140 mV。電泳結(jié)束后用考馬斯亮藍(lán)R250染色，最后用含45%甲醇和10%冰醋酸的水溶液脫色至背景清晰），結(jié)果見圖1。
采用JD801凝膠電泳圖像分析系統(tǒng)對(duì)電泳結(jié)果進(jìn)行分析，生成各泳道密度曲線圖［橫軸為泳帶的遷移率（Rf），縱軸為泳帶的積分光密度值（IOD）］，結(jié)果見圖2～5，每條泳帶對(duì)應(yīng)的分子量、遷移率、積分光密度值及其百分比（每條泳帶的`積分光密度值占整個(gè)泳道所有條帶積分光密度值的百分比）見表2～5。
由電泳結(jié)果可知，園參、野山參和西洋參的水溶性蛋白存在很大的差異，尤其是園參與野山參的差異最大。通過JD801凝膠電泳圖像分析系統(tǒng)的分析結(jié)果可以看出，三者的蛋白的分子量主要分布在60 000～10 000Da范圍內(nèi)，但在含量上卻存在很大的不同。園參蛋白包括分子量為60 229.34Da，38 819.94Da，27 634.28Da，25 151.99Da，21 276.71Da，18 187.72Da，16 467.65Da，10 448.78Da等8種蛋白，含量均比較高，其中分子量為27 634.28Da和25 151.99Da的蛋白的含量最高，其次為分子量60 229.34Da，16 467.65Da的兩種蛋白；野山參蛋白包括分子量為60 229.34Da，48 607.40Da，38 617.48Da，28 218.35Da，26 641.09Da，22 536.37Da，14 832.50Da，9 313.36Da等8種蛋白，但含量比較高的蛋白只有兩種，分子量分別為60 229.34Da，14 832.50Da，其它幾種蛋白的含量較園參均比較低；西洋參蛋白包括分子量為60 229.34Da，41 118.23Da，39 023.45Da，27 634.28Da，21 840.31Da，18 572.13Da，15 466.11Da，10 781.79Da等8種蛋白，其中分子量為27 634.28Da， 60 229.34Da，18 572.13Da 3種蛋白的含量較高，其它幾種蛋白的含量較園參也均比較低。
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